植物酯酶（plant’esterase,P-E）與動物膽堿酯酶（choliniesterase,ChE）一樣，酶活性可被有機磷（OP5）和氨基甲酸酯農藥所抑制，植物酯酶（P—E）可以水解醋酸萘酯為萘酚和醋酸，萘酚與顯色劑固藍B鹽反應生成紫紅色偶氮化合物，從而完成顯色反應。一旦植物酯酶活性被農藥所抑制，就不能完成顯色反應，表明樣品中含有農藥。 本研究使用固化的植物酯酶代替通常使用的動物膽堿酯酶。酶來源于市售面粉，向面粉中按1：5（w／v）比例加入蒸餾水，在振蕩器上振蕩30min，以5000r／min離心20min，上清液經濾紙過濾、濾液作為原酶液保存在4℃冰箱（或將酶液分裝后在真空冷凍干燥機上凍干成酶干粉、冰凍保存），使用前稀釋至一定倍數作為酶的工作液。取聚苯乙烯微孔反應板，用移液槍向每孔中加酶工作液20μL，使其均勻涂于孔壁，室溫下（或4℃冰箱）自然涼干后用無離子水沖洗3次，涼干、室溫干燥避光保存。微孔內壁固定有植物酯酶的塑料板稱為農藥酶檢測器。 采用梯度稀釋法在蒸餾水中分別配制1000μg／L、100μg／L、50μg／L、10μg／L、1μg／L的系列濃度的農藥標準溶液，在農藥檢測器上分別進行抑制試驗，待反應完成后，用肉眼觀察顯色結果，確定可分辨出的zui低標準溶液濃度結果證明靈敏度為10～100μg／L。 稱取不含農藥的小白菜、蘋果各2g，分別向其表面添加不同濃度農藥，室溫下涼干后，經20％甲醇提取后進行抑制試驗，觀察可分辨出的zui低農藥濃度，可得檢出限為0.1～1.Omg／kg。 將農藥檢測器、顯色劑、基質等組裝成農藥殘留檢測試劑盒。試劑盒與同類方法比較zui主要的區別有三點：一是試劑盒使用的是植物酯酶代替同類方法使用的乙酰膽堿酯酶（AchE）或丁酰膽堿酯酶（BuchE），酶源廣泛廉價易得：二是試劑盒使用的是固定化酶而不是同類方法使用的酶溶液，抗干擾力強；三是試劑盒使用20％甲醇作為蔬菜樣品的提取溶液而不是磷酸緩沖液或水，提取效率有所提高。 試劑盒只用于有機磷和氨基甲酸酯農藥檢測，檢出結果只是反應出這兩類農藥的綜合殘毒指標。它檢出的陰性樣品不表示不含有其它農藥或低于檢測限的有機磷和／或氨基甲酸酯農藥。
更新時間：2023-06-01 
瀏覽次數：1720
您的位置：
