信帆生物推出：免疫組化實驗檢測服務，歡迎！免疫組化實驗代測找上海信帆生物，您身邊的實驗專家！

我們在做免疫組化實驗的時候，總是會遇到這樣那樣的問題，上海信帆生物告訴大家免疫組化實驗過程中操作的要點具體是什么？

1.固定：用 4% 的多聚甲醛固定液。對于冰凍切片，甲醛固定有時比冰凍丙酮好；但對于不同的組織和抗原，可選用不同的固定液。 有時候商品化的抗體會有比較適合而推薦的固定液，請于購置前注意說明書。 
Bouin S 固定液：飽和苦味酸 750ml ，甲醛 250ml ，冰醋酸 50ml ，其對組織的穿透力較強，固定較好，結構完整，但因偏酸，對抗原有一定損害，且組織收縮明顯，不適于組織標本的長期保存。 
PLP 液：即高碘酸鈉 - 賴氨酸 - 多聚甲醛，適于固定石蠟切片。適于富含糖類組織，對超微結構及許多抗原的抗原性保存較好。 
2 ．組織脫水，透明：時間不能太長，否則在切片時容易碎片，切不完整。 
3 ．切片時展片：有些組織在切片后難以在水中展開，這時可適當地在水中加入幾滴乙醇。 
4 ．烤片： 60℃ 30 分鐘或 37℃ 過夜，溫度太高或時間太長，抗原容易丟失。 
5 ．蠟塊及切片的保存：在 4℃ 保存 
6 ．脫片問題： Poly-L-Lysine( 多聚賴氨酸 ) 為目前免疫組化染色工作中zui常用的一種防脫片劑， 6ml 的多聚賴氨酸溶液可按 1:10 稀釋成 60ml 的工作液，適合于需要酶消化、微波、高溫高壓的防脫片處理。如不行，可用雙重處理（ APES 和 Poly-L-Lysine ）的切片。在以上兩種條件都行不通的情況下，可用如下方法：切片在脫蠟前，放在 APES 1 ： 50 丙酮溶液中浸泡 3 分鐘，晾干，即可進行下一步。 
7 ．滅活內源性酶： HRP 系統： 3% 雙氧水滅活； AP 系統： 3%HAc 滅活。 
8 ．暴露抗原：對于石蠟切片的免疫組化實驗時，必須采用高溫加熱抗原修復，這將有助于暴露抗原決定簇，從而增加免疫組化染色的強度 ( 不同抗體的*修復液請參閱抗體說明書 ) 。對于不同的組織，不同的抗原，不同的抗體，所采用的方法應不一樣，可進行熱修復、胰酶消化、既不修復也不消化。膠原還可以用胃蛋白酶消化等。 
9 ．封閉：在山羊血清封閉，非特異性染色仍然較強時，可延長封閉時間或用濃縮血清封閉 
10 ．抗體稀釋：應遵循 “ 現用現配 " 的原則，對于 PBS 稀釋的抗體一定要當天使用。 
11 ．背景高：在抗體濃度、反應時間、反應溫度等合適的條件下，如果背景依舊高，可采用含 1‰ Tween20 的 PBS 洗，特別是在顯色之前要多洗。 
12 ．返藍：在蘇木素復染后，可用堿性緩沖液（如 PBS ）或 Na2HPO4 的飽和溶液返藍。 
13 ．顯色：一定要在顯微鏡下觀察，注意控制背景。

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