人IGG的elisa試劑盒，是一種利用雙抗體夾心法測定標本中IGG水平的科研試劑盒。上海信帆生物科技有限公司專業(yè)生物試劑人的IGG elisa檢測試劑盒，質量可靠，價格低廉。我們所生物試劑人IGG(免疫球蛋白G)elisa試劑盒，具有度高于市場同類產(chǎn)品，性價比在市場上具有很強的優(yōu)勢，如果有質量問題或者測試結果有問題，免費包退換。歡迎廣大師生朋友訂購，，號。

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定量檢測科研血清IgG蛋白質芯片的研制及應用研究

 隨著人類基因組測序工作的完成,對基因表達產(chǎn)物蛋白質的研究已成熱點。為揭示眾多蛋白質的作用和相互關系,從而真正解釋基因功能,以蛋白質組學為核心的后基因組研究已成為必然趨勢。蛋白芯片(protein chip)是按預先設計的方式將抗原或抗體固定在玻片上,形成蛋白質的微陣列,即蛋白質芯片,帶有特殊標記的蛋白質分子(抗體或抗原)與之特異性結合,通過對標記物的檢測來實現(xiàn)抗原抗體的高通量互檢。該技術所需蛋白質的量極少,檢測反應相對較快,具有通量化,穩(wěn)定性較好,靈敏度較高。

目前在國內外這方面的研究都才剛剛起步。蛋白質芯片以蛋白質代替DNA作為檢測目的物,比基因芯片更接近生命活動的物質層面,因而有著比基因芯片更加直接的應用前景。同時由于蛋白質芯片可利用微量生理或生物采樣即可同時檢測不同的蛋白質分子和蛋白質分子之間的相互作用,獲得各種條件下蛋白質組的變化.進而得以對基因的表達情況及基因功能進行深入研究。高通量定量檢測的蛋白質芯片是研究檢測和實驗研究*工具,本研究為研制玻片為載體的高通量蛋白質芯片,以科研血清IgG為研究模型,建立定量檢測蛋白質芯片技術平臺,并應用于科研血清IgG的檢測,其檢測結果與傳統(tǒng)的ELISA方法比較。

研究內容分兩個部分,1.介質表面修飾對蛋白質芯片固定率和反應性的影響。2.定量檢測科研血清IgG蛋白質芯片研制及應用研究。 *部分:對zui常用的三種玻璃表面化學修飾方法對蛋白質芯片質量的影響進行評價。為研制評價蛋白質固定效率的芯片,用Cy3標記的山羊抗人IgG抗體樣品,用含40%甘油的PBS溶液稀釋成為0.5 mg/L,0.75 mg/L,1 mgm,1.25 mg/L,1.5 mg╱L,1.75 mg╱L,2.0 mg╱L等濃度。取戊二醛、poly-L-lysine,GTPS環(huán)氧基修飾的玻片各一塊,按上述濃度點樣,每一濃度點1列3點,形成3×7的陣列,點樣過程的溫度為室溫(25℃),濕度為30%～40%。點樣完成后,將玻片放入濕盒中進行溫浴4h,晾干,用Genepix4000B掃描儀獲取熒光圖象。取出玻片,用PBST(PBS中含0.1%Tween-20)清洗3遍,每次5 min,再用PBS清洗5 min,晾干,再用Genepix4000B掃描儀獲取熒光圖象。 為研制評價蛋白質反應性的芯片,用倍比稀釋法,連續(xù)科研血清lgG樣品分別至3.125mg╱L,6.25mg/L,12.5mg/L,25mg╱L,50mg/L,100mg╱L等濃度,在戊二醛、poly-L-lysine修飾的玻片點樣,每一濃度點1列3點,形成3×7的陣列,點樣過程的溫度為室溫(25℃),濕度為30%～40%。點樣完成后,將玻片放入濕盒中進行:37℃溫浴4h,晾干,用1%BSA(質量體積比)作封閉,將玻片放入封閉液反應1h,降低非特異性吸附,用PBST(PBS中含0.1%Tween-20)清洗3遍,每次5min,再用PBS清洗5 min,將戊二醛修飾的破片用0.2%的硼化鈉還原Schiff堿形成更穩(wěn)定的單鍵結構。取Cy3 goat-anti-human IgG(0.5 mg╱L)1.6μl到芯片陣列的表面,用蓋玻片壓勻,放入濕盒中進行37℃溫浴1h,取出用PBST(PBS中含0.1%Tweon-20)清洗3遍,每次5 min,再用PBS清洗5 min,晾干,掃描儀獲取熒光圖象。三種修飾方法的芯片均可使蛋白質保持較好的固定效率和反應活性,由共價鍵偶聯(lián)的戊二醛修飾玻片不僅有更高的反應活性,而且圖象佳,但背景略高。預點樣10個拷貝點后,各蛋白質樣品的熒光測量值趨于穩(wěn)定,可正式點樣。點樣后的固定時間以24-48h為宜。時間過長或過短均會導致熒光測量值偏低。使用1%BSA封閉緩沖液的封閉效果。*的抗原一抗體特異性結合反應溫度為37 0C、時間為2h,選擇1mg/ml作為*的點樣濃度。

綜合評價,戊二醛修飾的蛋白質芯片優(yōu)于多聚賴氨酸修飾芯片,醛基修飾的蛋白質芯片用于科研和研究蛋白質檢測是可行的,這為蛋白質芯片的應用開發(fā)提供選擇的依據(jù)但應當探討如何降低醛基修飾芯片的背景這對于提高蛋白質芯片的敏感性和信噪比,具有重要意義,此方面技術有待進一步探索。 第二部分:建立定量檢測科研血清IgG蛋白質芯片的技術平臺。為研制定量檢測科研血清IgG蛋白質芯片,選擇醛基修飾的城片為載體,蛋白質樣品溶解于20%甘油的PBS,由機械手將濃度為0.5 mg/ml人IgG單克隆抗體點樣在玻片上,科研血清白蛋白為陰性對照,以1%的BSA為封閉液對蛋白質芯片進行封閉,并經(jīng)相應處理,構建用于定量檢測科研血清lgG蛋白質芯片。以IgG標準品為檢測對象,建立蛋白質芯片方法和ELISA方法的標準曲線,分別用蛋白質芯片方法和ELISA方法檢測10例科研血清IgG。將純化的羊抗人IgG 0.5mg/ml 30%甘油/PBS,點樣在經(jīng)硝酸纖維素修飾的片基上,以科研血清白蛋白為陰性對照,用1%BSA封閉,制備定量檢測科研血清IgG的蛋白質芯片;同時用ELISA檢測科研血清IgG。SPSS 10.0軟件分析蛋白質芯片和ELISA的試驗結果,采用單因素方差分析兩組間相關性。結果顯示蛋白質芯片和ELISA校準曲線的R~2值分別是0.996和0.994。兩種方法檢測的10例科研血清IgG含量,其檢測限均在1.56μg╱100μL。用單因素方差分析結果顯示f=0.188,P=0.670＞0.05,表明兩組間差異無顯著性意義,具有很好的一致性。本研究以科研血清IgG為模型,比較蛋白質芯片與ELISA在定量分析中的效果,顯示出二者的高度相關性。抗體芯片的基礎在于包被于芯片基質上的抗體的有效數(shù)量和活性,作為蛋白質芯片技術中應用前景的抗體芯片技術,在定量分析中有一定的優(yōu)勢。