IgM類單克隆抗體純化試劑盒使用說明書

                                                            立可純C080202（50ML純化量）

試劑原理：

本試劑盒利用不同類別免疫球蛋白結構特性，通過大量實驗分析驗證而得到的一個與傳統純化*不同的精細的具有高活性、高產率、快速以及良好重復性的單克隆抗體的純化方法，本試劑盒所用材料對人體沒有損害，安全環保。

試劑特點：

           本試劑盒特點在于純化操作的簡單化、所得抗體的高活性和高純度。實驗表明，本試劑盒可以得到95%左右純度的抗體；并且由于配方考究，抗體在純化過程中幾乎沒有損傷，*保持應有的活性，實際應用*。

適用范圍：

         本試劑盒僅適用于小鼠IgM類單克隆抗體腹水的純化，不能用于其它Ig類或亞類單克隆抗體腹水的純化實驗，如需要可選擇立可純系列其它貨號的純化試劑，它能為您帶來滿意結果。

試劑組成：

純化步驟：

1、將單克隆抗體腹水從冰箱中取出，室溫避光放置15分鐘，然

后用涼水邊沖邊搖勻快速解凍。

2、將化開的單克隆抗體腹水12000RPM 4-37℃離心10-20分鐘。

3、先吸棄zui上面浮沫和油脂，然后將上清轉出到另一個干凈容器或離心管；按每1毫升單克隆抗體腹水加入純化液A 1.3毫升，室溫避光倒轉20分。

4、8000RPM 4-37℃離心10-20分鐘，沉淀用純化液B溶解到原單克隆抗體腹水1/2體積；再按每毫升加入純化液C 1.2毫升，室溫避光倒轉10分鐘。

5、8000RPM 4-37℃離心10-20分鐘，棄沉淀收集上清；每1.1毫升上清液加純化液D 1.2毫升，室溫避光倒轉20分鐘。

6、8000RPM 4-37℃離心10-20分鐘，收集沉淀用純化液B收集溶解沉淀到原單克隆抗體腹水體積的1/2。

7、透析袋用PBST浸泡3-5分鐘，然后用手揉捏數次，自來水沖凈后接純水沖洗干凈，將純化好的抗體放入用透析夾或繩扎緊。

8、透析液用純水稀釋30倍，將要透析的抗體袋子放入。抗體體積：透析液體積=1:50，4℃攪拌透析每次1小時，共3-4次。

9、8000RPM 4-37℃離心10-20分鐘，收集上清測蛋白濃度并調控在5mg/ml左右zui后加10/萬NaN3防腐并除菌過濾4℃備用。

注意事項：

1、溶血和腐敗的腹水不得用于純化（血性腹水離心后除去紅細胞等可正常純化）。

2、離心溫度不要超過37℃。

3、操作和量取試劑要細致。

4、不攪拌透析每次時間不得低于2小時。