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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RealTime PCR）技術(shù)服務(wù)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR 技術(shù)即是在PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)

整個(gè)PCR 進(jìn)程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 避免

了傳統(tǒng)PCR 以終產(chǎn)物檢測(cè)定量產(chǎn)生的偏差，提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)

胞mRNA 表達(dá)量的變化；比較不同組織的 mRNA 表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA 干擾的實(shí)驗(yàn)

結(jié)果等。

SYBR Green 熒光染料法

SYBR Green 是一種DNA 結(jié)合染料，能非特異地?fù)饺氲诫p鏈DNA 中去。在游離狀態(tài)下，它不發(fā)出熒光，

但一旦結(jié)合到雙鏈DNA 中以后，便可以發(fā)出熒光。它的zui大優(yōu)點(diǎn)就是可以與任意引物、模板相配合，用

于任意反應(yīng)體系中。從經(jīng)濟(jì)角度考慮，它也比其它的探針的價(jià)格要便宜得多。但由于它能與所有的雙鏈DNA

結(jié)合，所以一旦反應(yīng)體系中出現(xiàn)非特異擴(kuò)增，那它就會(huì)影響到定量結(jié)果的可靠性與重復(fù)性。要避免這種不

利因素，可以通過選擇良好的引物并優(yōu)化反應(yīng)條件以消除非特異性影響。

TaqMan 熒光探針法

PCR 擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記

一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR 擴(kuò)

增時(shí)，Taq 酶的5-3外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系

統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA 鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR 產(chǎn)

物形成*同步。

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