MPO試劑基本信息

MPO試劑盒太好用啦

髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）又稱過氧化物酶，是血紅素輔基的血紅素蛋白酶，是血紅素過氧化物酶超家族成員之一。存在于髓系細胞（主要是中性粒細胞和單核細胞）的嗜苯胺藍顆粒中，是髓細胞的特異性標志，隨著對MPO研究的深入，人們發現MPO基因多態性導致個體對一些疾病易感性的差異，與人類多種疾病的發生、發展密切相關，因此越來越受到國內外學者的重視。

髓過氧化物酶(MPO)測試盒說明書

 MPO是中性粒細胞的功能標志和激活標志，其水平及活性變化代表著嗜中性多形核白細胞（PMN）的功能和活性狀態。純化的人MPO活性為25～35IU/mg，水溶性好，底物H2O2濃度>0.8mmol時酶受抑制，酶反應*pH為4.5～5.5，當pH≥10，或≤2時酶失活。MPO的主要功能是在吞噬細胞內殺滅微生物，利用過氧化
氫和氯離子產生次氯酸鹽，并形成具有氧化能力的自由基。構成MPO–H2O2–鹵素系統。unionluck研究發現，MPO不僅能殺滅吞噬于細胞內的微生物，而且可釋放到細胞外，破壞多種靶物質，如腫瘤細胞、血小板、NK細胞、原蟲、毒素等，對機體產生和調節炎癥反應等多方面發揮作用。然而，在特定條件下，MPO催化反應生成過量的氧化劑（HOCl、3–氯化酪氨酸、酪氨酰基、硝基酪氨酸等），超過局部抗氧化劑的防御反應時，就會導致氧化應激和氧化性組織損傷。MPO還參與調節炎癥反應的許多過程，MPO缺陷的中性粒細胞因過量的注入炎癥部位而發生氧化反應，大量的超氧化物和氧化物形成，造成炎癥部位組織細胞損傷。此外還有協和洛克的學者發現MPO能與DNA牢固結合形成復合物，有效保護DNA防止其在氧化過程中受損，從而保證髓系細胞的正常分化成熟及功能。嗜中性粒細胞是粒狀白血細胞，在寄主防衛以及噬菌作用破壞感染性細菌的過程中起著重要作用。教科書上關于嗜中性粒細胞功能的模型是這樣的：將毒性過氧化物釋放進含有被攝取的微生物的小囊中，接下來是由髓過氧化物酶催化的鹵化作用。

髓過氧化物酶(MPO)測試盒說明書

一．試劑組成與配制：（100T/48樣）

試劑一：緩沖貯備液35ml X 1瓶，4℃保存6個月

         緩沖應用液的配制：  貯備液：雙蒸水=1:9，按需要量配制，4℃保存1個月。

試劑二： 粉劑X2支，4℃保存6個月。臨用時每支加緩沖應用液60ml溶解，可以37℃加熱溶解，4℃保存2周。

【注】若您所需測的是組織樣本，并且除髓過氧化物酶之外，還需測其他項目時，此時每支試劑二粉劑需配成濃縮一倍的溶液，即每支試劑二粉劑加到緩沖應用液30ml中。

試劑三： 粉劑 X3支，溶劑6mlX3支，4℃保存6個月。用時1支粉劑倒入1支溶劑中溶解，提前一天配制，充分溶解后4℃保存2周。

試劑四：溶液24mlX1瓶，天冷時會凝固。用前放入37℃以上的水中搖晃使其溶解至透明后方可應用，室溫保存6個月。

試劑五：粉劑X2支，4℃保存6個月。

試劑六：溶液0.5mlX1支，4℃保存6個月。

     顯色劑的配制：臨用時將試劑五粉劑1支加到100ml緩沖應用液中，充分搖勻，待粉劑*溶解后再加入試劑六0.1ml，充分混勻，配制好的顯色劑4℃避光保存。

試劑七：溶液6ml X1支，4℃保存6個月。

二．組織樣本的MPO測定

（一）、樣本前處理

       1.準確稱取組織重量，以配制好的試劑二溶液為勻漿介質，按重量體積比為1:19加勻漿介質制備成5%的組織勻漿，不需要進行離心。

【注】：若您除做髓過氧化物酶之外，還需要測其他指標時，則組織勻漿制備要按下面方法：

1.試劑二配制時要濃縮一倍，即每支試劑二粉劑加到30ml緩沖應用液中；

2.先用生理鹽水為勻漿介質按實驗方法學制成濃縮一倍的勻漿，即10%勻漿（腦組織制備成20%勻漿），不要離心，取出部分濃縮一倍勻漿按1:1比例加入濃縮一倍的試劑二溶液，混勻后再進行測定。

2.取5%組織勻漿0.9ml加3號試劑0.1ml，（如果組織勻漿量不夠，可以按9:1的比例減少組織勻漿及3號試劑的用量），充分混勻后37℃水浴15分鐘，取出后待測。

（二）、操作表：

混勻，60℃水浴10分鐘，取出后立即在460nm處，1cm光徑，雙蒸水調零，測各管吸光度值。

注1： 天冷時，反應液會出現凝固狀態，吸光度上升，您可以用25 - 37℃水浴箱或取一個盛25 - 37℃熱水的燒杯放在比色機旁邊，將各待測管一次放入水浴箱或燒杯中1 - 2 分鐘，待凝固消失后即可進行比色。

注2：混勻時，用漩渦混勻器，使液體上下充分混勻（一定要使zui下面液體也能旋轉到上面，建議不要用尖底的管子做，尤其不可用1.5ml的EP管，因為這樣非常難混勻）

（三）、計算：

1.酶活力單位定義：每克組織濕片在37℃的反應體系中，H2O2被分解1umol為1個酶活力單位。

2.計算公式：MPO活力=

3.計算舉例：

例一：取5%的小鼠心肌勻漿0.2ml按上述步驟進行檢測，測得對照管吸光度為0.030，測定管吸光度為0.164，則計算如下：

例二：取5%的大鼠肝勻漿0.2ml按上述步驟進行檢測，測得對照管吸光度為0.028，測定管吸光度為0.183，則計算如下：

例三：取10%的大鼠肝勻漿0.2ml按上述步驟進行檢測，測得對照管吸光度為0.002，測定管吸光度為0.012，則計算如下：

【注】*11.3為斜率的倒數

      ** 取樣中所含組織濕片的量（克）

     *** 0.05為5%的組織勻漿，即5克組織/100ml組織勻漿。

**** 0.2為取樣量0.2ml。

• 血清（漿）樣本中MPO測定

（一）、血清（漿）樣本前處理：

   1、 取血清（漿）與試劑二按1:1比例稀釋，充分混勻。

  2.取上面的混合液0.9ml加3號試劑0.1ml，（如果混合液量不夠，可以按9:1的比例減少混合液及3號試劑的用量），充分混勻后37℃水浴15分鐘。

（二）、操作表：

混勻，60℃水浴10分鐘，取出后立即在460nm處，1cm光徑，雙蒸水調零，測各管吸光度值。

注1:天冷時，反應液會出現凝固狀態，吸光度上升，您可以用25~37℃的水浴箱或取一根盛25~37℃熱水的燒杯放在比色機旁邊，將各代測管一次放入水浴箱或燒杯中1~2分鐘，待凝固消失后即可進行比色。

注2：混勻時，用漩渦混勻器，是液體上下充分混勻（一定要使zui下面液體也能旋轉到上面，建議不要用尖底的管子做，尤其不可用1.5ml的EP管，因為這樣非常難混勻）

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（三）、計算：

1、酶活力單位定義：每升血清（漿）在37℃的反應體系中H2O2被分解1umol為1個酶活力單位。

2、計算公式：

3、計算舉例：

        取0.45ml的血清加0.45ml的試劑二充分混勻，再加0.1ml的試劑三，再充分混勻，37℃水浴15分鐘后，取0.2ml做檢測，測得測定管OD值0.053，對照OD值0.013，則計算如下：

注：*     11.3為斜率的倒數

    **    取樣中所含血清的量（升）

    ***   0.45為血清的量

    ****  0.2為取樣量0.2ml

四、測定原理：

        中性白細胞中存在有髓過氧化物酶 ，每個細胞中所含的酶的量是一定的，約占細胞干重的5%，該酶具有使過氧化氫還原的能力，利用這一特點可以分析酶的活力，并定量測定中性白細胞的數目。其原理如下：

MPO+H2O2→復合物；復合物+AH2(供氫體) →H2O+MPO+A產物

通過供氫體鄰連茴香胺供氫后生物試劑黃色化合物，在460nm處通過比色測定A產物的生成量，從而推算出MPO的活力以及H2O2減少的量和白細胞的數目。

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