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硫酸葡聚糖-瓊脂糖NuPerley DexS-HbP和NuPerley DexS-VirS是將硫酸葡聚糖（Dextran Sulfate）鍵合在新一代高剛性瓊脂糖微球NuPerley 上形成的一種親和層析分離介質。硫酸葡聚糖又稱右旋糖酐硫酸酯，是天然多糖右旋糖酐的合成衍生物，具有與肝素類似的的生物活性，是一種非動物源的仿肝素配基，填料產品被稱為仿肝素親和填料。
產品型號：廠商性質：生產廠家更新時間：2024-08-02訪 問 量：906
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硫酸葡聚糖-瓊脂糖
1 、產品介紹
NuPerley DexS-HbP和NuPerley DexS-VirS是將硫酸葡聚糖（Dextran Sulfate）鍵合在新一代高剛性瓊脂糖微球NuPerley 上形成的一種親和層析分離介質。硫酸葡聚糖又稱右旋糖酐硫酸酯，是天然多糖右旋糖酐的合成衍生物，具有與肝素類似的的生物活性，是一種非動物源的仿肝素配基，填料產品被稱為仿肝素親和填料。
NuPerley DexS-HbP的含硫量相對低（40~80μmol/mL），可用于蛋白的親和分離、純化，例如血漿蛋白。同時，硫酸酯是一種優良的耐鹽型陽離子交換配基，NuPerley DexS-HbP也可作為陽離子交換填料，對溶菌-酶的結合量大于60mg/mL，且在50~150mM NaCl鹽濃度下仍結合良好。
NuPerley DexS-VirS的含硫量相對高（70~130 μmol/mL），主要用于用于病毒和病毒樣顆粒（VLP）的捕獲與純化。
2 、產品特點與技術指標
產品名稱 | 硫酸葡聚糖-瓊脂糖 | |
目錄編號 | NRPB114L NRPB114S（預裝柱） | NRPB115L NRPB115S（預裝柱） |
基質 | 高剛性瓊脂糖 | |
配基 | 硫酸葡聚糖，含硫量 40~80 μmol/mL | 硫酸葡聚糖，含硫量 70~130 μmol/mL |
粒徑范圍 a | 30~100 μm | |
平均粒徑 | ~60 μm | |
溶菌-酶結合量 | ≥60 mg/mL | ~100 mg/mL |
推薦工作流速 | 60~300 cm/h | |
最大流速與壓力 b | >1500 cm/h ，0.3 MPa | |
使用 pH | 4~13（長期穩定性），3~14（CIP 等短時間操作） | |
化學穩定性 | 在常用的水相緩沖液、0.5 mol/L 氫氧化鈉、8 mol/L 尿素、30%異丙醇和 70% 乙醇等體系中穩定。8 | |
貯存與運輸 | 20%乙醇，2~8 ℃ | |
注：a90%體積以上的微球在此粒徑范圍；b 10 cm 柱高下的最大測試流速。
3 、使用方法參考
3.1 色譜柱裝填
以下闡述與層析系統連接時，填料的色譜柱裝填方法。
（1）所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體最好做脫氣處理。裝柱液一般為純水，也可含10~100 mM NaCl。
（2）填料用量計算：通過沉降定量填料體積，需要的沉降填料體積=柱體積×壓縮比（也稱壓縮因子）。沉降體積是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降完-全讀取的穩定 體積。NuPerley DexS-HbP和NuPerleyDexS-VirS 的壓縮比為~1.10。為使達到裝柱比，可通過柱頭下壓的方法，也可以通過高流速壓柱。
（3）填料清洗：將填料懸液充分搖勻后量取相應體積，抽濾除去液體，并用約3倍填料體積的純化水洗滌，重復3次，以除去保存液。
（4）裝柱填料懸液準備：將填料轉移到適當的容器中，加入適量的裝柱液，制成50~75 v%的裝柱填料懸液，使用前攪勻。
（5）裝填前準備：在清洗干凈的層析柱下端加入裝柱液，以除去下墊片及層析柱下端的空氣，在柱內保留少量的純水，擰緊下堵頭，調整柱子使其垂直于地面。
（6）裝填：將攪勻后的填料懸液一次性緩慢倒入層析柱內（必要時使用裝柱器），為避免引入氣泡，應使之沿層析柱內壁自然流下。將所有填料加入后，用裝柱液將裝柱器加滿，擰緊裝柱器上蓋，將柱子與層析系統連接。
（7）壓柱：使柱內填料自然沉降（或50~150 cm/h 的低流速下沉降），待填料沉降完-全后（填料與液體的界面清晰），去除裝柱器，裝上上柱頭，并將柱頭下降至界面處；通過高流速（推薦流速見下表，注意柱壓不超過0.3MPa），繼續壓柱至界面清晰穩定，標記界面穩定時的柱高。停泵，打開柱頭上的閥門/堵頭，關閉柱底的閥門/堵頭，下壓柱頭至標記位置下方與壓縮比對應的位置，旋緊柱頭，裝柱完成。裝柱完成后，需用高流速平衡柱內的填料。
裝柱條件 | NuPerley DexS-HbP | NuPerley DexS-VirS |
壓縮比 | 1.10 | |
裝柱流速 | 600~1500 cm/h | |
3.2 柱效測定和評價
完成裝柱后、使用前可通過柱效測定和評價可以確認層析柱裝填質量。柱效通常用理論塔板高度（HETP）和非對稱因子（As）來評價。
3.3 平衡與上樣（Equilibration & Loading）
在上樣前，可用初始緩沖液A 在操作流速下平衡層析柱，觀察檢測器的變化，直到電導、pH 等參數不變。根據應用不同，本產品的緩沖液體系可為磷酸鹽、檸檬酸鹽和Tris-HCl 等，pH 為4~9 居多，例如10 mM PB + 150 mM NaCl ，pH7.5。
樣品通常溶于上述緩沖液A，或者將樣品溶液進行換液處理，置換成緩沖液A 體系。上樣量可按“mg 目標蛋白/mL 填料"來設定，通常為DBC10% 的50~80%，例如NuPerley DexS-HbP 產品對溶菌-酶的DBC10%為~10 mg/mL，純化 BSA 時的上樣量可為5~10 mg/mL。除了DBC10%，也可以測試上樣流穿液中的目標蛋白確定上樣量。
3.4 洗脫（Elution）
洗脫過程則可以進一步提高緩沖液A 中的鹽濃度，添加0.5~2 M 的NaCl 可將目的 蛋白有效洗脫。在前期工藝篩選時建議用線性梯度洗脫以確定合適的洗脫濃度，在工藝優化和確定時建議用階躍梯度洗脫，以節省洗脫液體積和提高效率。
3.5 再生（Regeneration）和在位清洗（CIP）
通常上述的再生過程可將填料徹-底清洗。若發生柱壓升高，或為了避免交叉污染，可采用以下溶劑進行再生與在位清洗：1~2 mol/L NaCl，0.5 mol/L NaOH、70%乙醇或 30% 異丙醇等。在位清洗可有效去除介質上的雜質，反向效果更佳。清洗后需用3~5 柱體積的純水除去上述溶劑。
3.6 填料保存
填料的初始保存液為 20%乙醇，使用過后可繼續用相同的保存液，也可在20%乙醇的基礎上添加0.1~1 M NaCl。保存溫度在2~8 ℃為宜，不可凍存。
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