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Western blot實(shí)驗(yàn)代測(cè)，WB實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)

免疫印跡（immunblotting）又稱(chēng)蛋白質(zhì)印跡（western blot）,他是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。western blot是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡（western blot）具有

SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性，現(xiàn)在已成為蛋白分選的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡（western blot）常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分選。

客戶(hù)需新鮮或正確保存的蛋白樣品， 檢測(cè)目的蛋白的一抗（常規(guī)指標(biāo)本公司提供一抗）。樣品要求為：

1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。

2、細(xì)胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。

3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。
 

Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供

內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張，可提供掃描圖，實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括整個(gè)試驗(yàn)流程所涉及的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)步驟。如需進(jìn)行蛋白純化服務(wù)，將提供檢測(cè)報(bào)告

Western blot實(shí)驗(yàn)服務(wù)

服務(wù)內(nèi)容

我們提供從蛋白制備、蛋白電泳到Western blot檢測(cè)的全流程服務(wù)，如需要還可進(jìn)行灰度分析。

說(shuō)明

1、建議提供目的蛋白陽(yáng)性表達(dá)樣品（純蛋白或有陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞或組織）作為陽(yáng)性對(duì)照。

2、每張膜檢測(cè)1-8個(gè)樣品。

3、如果一抗由客戶(hù)提供，請(qǐng)?jiān)谡_條件下保存，避免污染及反復(fù)凍融。

western blot (WB)服務(wù)須知： 
1. 樣本要求盡可能新鮮；
2. 樣本量：組織樣本，質(zhì)量大于100mg；細(xì)胞樣本，細(xì)胞數(shù)大于1×106；
3. 您可自備一抗，也可讓我公司代買(mǎi)。為保證質(zhì)量，抗體醉好為進(jìn)口單克隆抗體；
4. 服務(wù)時(shí)限和內(nèi)容：收到樣本之日起2-3周內(nèi)提交實(shí)驗(yàn)結(jié)果，具體包括實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器、圖片及相關(guān)分析數(shù)據(jù)等；
5. 報(bào)告提供：實(shí)驗(yàn)結(jié)果將以電子或書(shū)面形式提交給您。

Western blot的原理 
   Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過(guò)PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類(lèi)型及其生物學(xué)活性不變。

   以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。

Western blot實(shí)驗(yàn)代測(cè)，WB實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)

為什么同一批次提取蛋白跑出的條帶不*？

這個(gè)問(wèn)題很多老師在做western blotting的時(shí)候遇見(jiàn)過(guò)，內(nèi)參*，而目的條帶每次都不一樣，原因可能是在顯影液環(huán)節(jié)，簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)就是你的膜沒(méi)有淋干凈，上面殘留參差不齊的T/TBS，T/TBS能稀釋顯影液，目的條帶本來(lái)表達(dá)量就少，某一個(gè)點(diǎn)殘留的T/TBS稍微多一點(diǎn)就可能導(dǎo)致顯影效果下降，所以建議在顯影液反應(yīng)前，盡量將膜上的洗膜液淋掉（當(dāng)然也不能讓膜干了，要是實(shí)驗(yàn)室富裕的話(huà)，也可以多添點(diǎn)顯影液，效果一樣）。

Western blot實(shí)驗(yàn)代測(cè)，WB實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)